Интерпретация иммунологических исследований

Ключевую роль в постановке точного диагноза и дальнейшей судьбе пациентов с врожденными ошибками иммунитета играет лабораторная диагностика и правильная интерпретация результатов иммунологического исследования. Начальник сектора клинической иммунологии лаборатории клинической иммунологии и аллергологии отдела клинической лабораторной диагностики Медицинской лаборатории ДІЛА к.м.н. Инна Пшеничная и научный консультант ДІЛА, заведующий кафедрой педиатрии, иммунологии, инфекционных и редких заболеваний Международного европейского университета д.м.н., профессор — Анастасия Бондаренко рассказали о методе проточной цитофлюорометрии в диагностике врожденных ошибок иммунитета и особенностях клинических проявлений.

Проточная цитофлюориметрия — современная технология измерения параметров клетки и происходящих в ней процессов.

Она позволяет осуществлять:

• Иммунофенотипирование клеток периферической крови
• Определение фагоцитарной активности
• Определение внутриклеточных цитокинов
• Оценка активности внутриклеточных ферментов с помощью флюорогенных субстратов
• Анализ стадий клеточного цикла
• Исследование механизмов клеточной гибели (апоптоз)
   

Оценка функциональной активности гранулоцитов в ДІЛА осуществляется методом проточной цитофлюориметрии с исследованием окисления дигидрородамин 123 (DHR-тест). Тест основан на стимуляции клеток крови бактериями E.coli. В процессе поглощения бактерий фагоциты активируют NADPH-оксидазу с последующим образованием активных форм кислорода (окислительный взрыв). Ионы гипохлорида внутри фагоцита окисляют дигидрородамин 123 (DHR123) во флюорисцентный родамин 123, который детектируется на проточном цитометре. У пациентов с хронической гранулематозной болезнью снижена или отсутствует активность НАДФH-оксидазы, что приводит к уменьшению или отсутствию превращения DHR в флуоресцентный родамин.

Крайне низкие показатели (1/10 и ниже нормы) окислительной интенсивности после стимуляции E.coli и PMA являются диагностическим маркером хронической гранулематозной болезни (ХГХ) или дефицита миелопероксидазы (MPO).

Оценка фагоцитарной активности – функциональной активности гранулоцитов – методом проточной цитофлюориметрии с исследованием окисления дигидрородомина 123 (DHR-тест) из коммерческих лабораторий Украины осуществляется эксклюзивно в ДІЛА и считается наиболее объективным методом и является «золотым стандартом».

Сложным вопросом является дифференциальная диагностика между первичными и вторичными иммунодефицитами на фоне тяжелых заболеваний почек, кишечника и онкологических заболеваний и/или иммуносупрессивной терапии. В помощь в решении этого вопроса могут служить такие исследования как изогемагглютинины альфа и бета, В-лимфоциты памяти, T-клеточное звено (ab-gd-Т-клетки) и T-клеточное звено (CD45RA-RO).

На результаты иммунологических тестов в значительной степени влияют:

• преаналитические факторы – условия забора крови и транспортировки, что важно для «выживания» клеток крови к моменту проведения исследования
• применение иммунотропных препаратов: глюкокортикоидов, цитостатиков, переливания плазмы и препаратов иммуноглобулинов
• тяжелое течение инфекционного/воспалительного процесса
   

Анализ показателей иммунологического обследования в сопоставлении с клинической картиной, данными анамнеза и получаемого лечения поможет избежать ошибочной трактовки.

Для уточнения силы влияния тех или иных факторов на иммунологические показатели и минимизации субъективизации интерпретации в ДІЛА работает проект медмониторинга иммунологических исследований (функциональная активность гранулоцитов, субпопуляции лимфоцитов) путем заполнения анкет, интегрированных в бланк иммунологического направления:

Анализ анкет позволит предоставить экспертную интерпретацию результатов иммунологических тестов с использованием графических изображений, а также помочь врачу в принятии правильного клинического решения: