Хелікобактеріоз, H. pylori, ДНК методом ПЛР - якісний з визначенням резистентності до кларитроміцину

Діагностичний напрямок

Функціональний стан організму

Загальна характеристика

Однією з основних терапевтичних проблем протягом багатьох десятиліть було лікування виразкової хвороби та хронічного гастриту, а також профілактика раку шлунка. На  сьогоднішній день встановлено, що ці захворювання в більшості випадків обумовлені інфекцією Helicobacter pylori. Підраховано, що ≈60 % світової популяції інфікована H. pylori (в Східній Європі ~80% дорослих і ~30% дітей та молоді). Інфікування відбувається аліментарним шляхом; єдиним відомим резервуаром бактерії є слизова оболонка шлунка людини. H. pylori — це грамнегативний мікроорганізм спіралевидної форми, який адаптувався до життя в кислоті. Він викликає хронічний гастрит, який може прогресувати до таких важких ускладнень, як виразкова хвороба, аденокарцинома шлунка та MALT-лімфома шлунка. Своєчасне лікування інфекції H. рylori в поєднанні з корекцією способу життя є складовою лікування і профілактики подальшого розвитку пептичної виразки та злоякісних новоутворень шлунка.

Сучасне лікування інфекції H. pylori складається з потрійної або четвертної схем, що включають інгібітор протонної помпи та антибіотики, такі як амоксицилін і кларитроміцин. Однак побічні ефекти, погане дотримання режиму лікування та резистентність до призначених антибіотиків є поширеними причинами неефективності лікування.

Одночасне виявлення та ідентифікація Helicobacter pylori і 3 основних мутацій, що викликають резистентність до кларитроміцину, за допомогою ПЛР у реальному часі є доведеною необхідністю перед призначенням терапії. https://www.dec.gov.ua/wp-content/uploads/2023/08/2023_kn-peptychna_vyrazka_.pdf Пептична виразка шлунка та дванадцятипалої кишки Клінічна настанова, заснована на доказах 2023р.
Резистентність до кларитроміцину відбувається, за дуже небагатьма винятками, через мутації в гені 23S рРНК. Відносно небагато мутацій (найголовніше, A2143G, A2142G і A2142C) відповідальні за майже всю клінічну резистентність.
Згідно новій Клінічні настанові: «Пептична виразка шлунка та дванадцятипалої кишки Клінічна настанова, заснована на доказах 2023р». https://www.dec.gov.ua/wp-content/uploads/2023/08/2023_kn-peptychna_vyrazka_.pdf ВООЗ і Рада Європейського Союзу виступають за розумне використання антибіотиків, щоб уникнути розвитку бактеріальної резистентності, що є однією з найбільших загроз глобальному здоров’ю.
Тест на чутливість до кларитроміцину, якщо він доступний через проведення молекулярних методів або культури, рекомендується перед призначенням будь-якої терапії, що містить кларитроміцин. Згода 91%. Рівень доказів A1. Застосування систематичного виявлення резистентності до кларитроміцину дозволить використовувати оптимізовану потрійну терапію для 60–90% пацієнтів відповідно до рекомендацій EHSG (European Helicobacter and Microbiota Study Group (EHSG) - Європейська група з вивчення Helicobacter pylori), а отже, обмежити наслідки четвертної терапії.

Показання для призначення

1. Діагностика інфекції Helicobacter pylori у пацієнтів із диспепсичними розладами, гастритом, виразковою хворобою шлунка і 12-палої кишки, та іншою патологією ШКТ.
2. Встановлення чутливості Helicobacter pylori до кларитроміцину з метою підвищення ефективності ерадикаційної терапії (шляхом призначення інших антибіотиків), у пацієнтів із диспепсичними розладами, гастритом, виразковою хворобою шлунка і 12-палої кишки, та іншою патологією ШКТ.
3. Діагностика інфекції Helicobacter pylori та встановлення чутливості до кларитроміцину у пацієнтів, яким може бути рекомендована ерадикаційна терапія, а саме: з залізодефіцитною анемією нез’ясованого походження , хронічною ідіопатичною тромбоцитопенічною пурпурою, дефіцитом вітаміну В12, MALT-лімфомою шлунку та родичам першого ступеня споріднення хворих на рак шлунка.

Маркер

Маркер наявності збудника Helicobacter pylori в біоматеріалі,який досліджується. За допомогою мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі визначають мутації А2143G, А2142G і А2142C в гені 23S рРНК, які є маркером резистентності до кларитроміцину.

Клінічна значущість

Правила підготовки пацієнта

Правила доставки біоматеріалів до лабораторії

Інтерференція:

• Interfering         Substances                        Test concentration
  1                        Amoxicillin                            206 μmol/L
  2                        Barium sulfate                      5 mg/ml
  3                        Bilirubin                                342 μmol/L
  4                        Bismuth Subsalicylate (pepto-Bismol) 0.175 mg/ml
  5                        Cimetidine (Tagamet)         79.2 μmol/L
  6                        Clarithromycin                     26.7 μmol/L
  7                        Hemoglobin human             2 g/L
  8                        Metronidazole                     701 μmol/L
  9                        Mucin (bovine submaxillary gland, type I-S) 3 mg/ml
  10                     Omeprazole (prilosec OTC) 17.4 μmol/L
  11                      Palmitic Acid                         6 mmol/L
  12                      Stearic acid                          0.4 mmol/L
  13                      Triglyceride (Intralipid)         37 mmol/L 

  Додавання  13 наведених в таблиці речовин, в представлених концентраціях  не вплинуло ( ↑, ↓) на отриманий результат тесту.
  
  

• Присутність у зразку калу: крові (гемоглобін і продукти його розпаду), жовчі, надлишку неорганічних солей, важких металів, полісахаридних комплексів  та білків, прийом антибактеріальних препаратів, ІПП ( омепразол, пантопразол), препаратів вісмуту ( де-нол)  може призводити до хибно-негативного результату.

  
  

Інтерпретація:

• Результат		Коментар
  Хелікобактеріоз, Helicobacter pylori, ДНК методом ПЛР - якісн.	Мутація 23S рРНК*
  +	+	Виявлено H. pylori та встановлено резистентність до кларитроміцину
  +	-	Виявлено H. Pylori, не встановлено резистентність до кларитроміцину
  -	-	Не виявлено, не встановлено резистентність

  * Мутація 23S рРНК включає А2143G, А2142G і А2142C

• Аналітична чутливість тест-системи становить 2500 копій/мл. Один аналіз не повинен використовуватися як єдиний критерій для прийняття рішення про лікування; результати цього тесту повинні бути співвіднесені з клінічними проявами та результатами інших лабораторних тестів. Негативний результат (відсутність  в матеріалі  Helicobacter pylori)  не скасовує наявність збудника або активного захворювання.H. pylori може переходити в кокоїдну форму, коли їм важко виживати в навколишньому середовищі, і ця характеристика може перешкоджати точному виявленню мікроорганізму. Збільшення наявності кокоїдної форми та наявність мутації може призвести до хибнонегативного результату.